微量細(xì)胞核酸提取首要挑戰(zhàn)是核酸得率低。微量細(xì)胞本身含有的核酸量極少，提取過程中不可避免的吸附損失、離心殘留等問題，會(huì)進(jìn)一步降低最終獲得的核酸量，難以滿足下游PCR、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)對(duì)模板量的需求。對(duì)此，可采用優(yōu)化的提取試劑，如選擇吸附效率更高的硅基磁珠，其能在低濃度下特異性結(jié)合核酸，減少吸附損失；同時(shí)改進(jìn)提取流程，縮短離心時(shí)間、降低離心轉(zhuǎn)速，減少核酸在離心管壁的殘留，還可通過增加洗脫次數(shù)、提高洗脫溫度（如50-60℃），提升核酸洗脫效率，提高得率。

 

　　核酸純度差是另一大難題。微量細(xì)胞樣本中，蛋白質(zhì)、多糖、脂質(zhì)等雜質(zhì)相對(duì)含量較高，提取時(shí)易與核酸共純化，干擾后續(xù)酶促反應(yīng)。為解決這一問題，需強(qiáng)化樣本預(yù)處理環(huán)節(jié)，加入蛋白酶K可有效降解蛋白質(zhì)，使用RNase抑制劑避免RNA降解；在純化階段，增加洗滌次數(shù)，選用含胍鹽、乙醇的洗滌緩沖液，去除雜質(zhì)；對(duì)于高雜質(zhì)樣本，可引入核酸純化柱二次純化，進(jìn)一步提高核酸純度。

 

　　此外，樣本污染風(fēng)險(xiǎn)高也是微量細(xì)胞核酸提取中不可忽視的挑戰(zhàn)。微量核酸樣本極易受到外源性核酸（如環(huán)境中微生物核酸、操作人員攜帶的核酸）污染，且一旦污染，因樣本量少，污染核酸對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾更為顯著。為防范污染，需建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)環(huán)境，在超凈工作臺(tái)或負(fù)壓生物安全柜中進(jìn)行操作，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、儀器進(jìn)行消毒；使用無(wú)核酸酶的實(shí)驗(yàn)耗材和試劑，避免試劑本身攜帶污染；同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照（如空白提取試劑）和陽(yáng)性對(duì)照，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)提取過程是否存在污染。

 

　　針對(duì)微量細(xì)胞核酸提取中的得率、純度、污染等挑戰(zhàn)，通過優(yōu)化試劑與流程、強(qiáng)化質(zhì)量控制，可有效提升核酸提取質(zhì)量，為后續(xù)科研與臨床應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。