免疫組化服務(wù)是通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究。組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。

1、出現(xiàn)非特異性背景染色怎么辦？

(1)沖洗不充分解決：每步?jīng)_洗3×5

(2)組織中含過氧化物酶未阻斷解決：可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長

(3)組織中含內(nèi)源性生物素解決：正常非免疫動物血清再封閉

(4)血清蛋白封閉不充分解決：延長血清蛋白封閉時間

2、脫片產(chǎn)生的原因有哪些？

（1）組織切的不好，切的不均勻。

（2）時間短，溫度不夠。

（3）操作不規(guī)范，有脫片嫌疑的片子最好不甩或輕輕甩，用衛(wèi)生紙從邊緣上慢慢吸水。

（4）抗原修復(fù)的時候高壓時間過長了。此外，用EDTA修復(fù)比檸檬酸容易脫片。

（5）使用PBS的時候盡量用泡的，不要沖。

3、染色陰性怎么辦？

（1）操作步驟錯誤，重新試驗，設(shè)立陽性對照

（2）組織中無抗原，設(shè)立陽性對照片，以驗證實驗結(jié)果

（3）一抗與二抗種屬連接錯誤，仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤

4、蘇木素復(fù)染后氨水返藍(lán)怎么做?

返藍(lán)可以用堿性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度溫水.冷水藍(lán)化均可。一般藍(lán)化5~10min。

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