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細(xì)胞磷酸化蛋白提取的方法
發(fā)布日期：
2016-10-19
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2917
磷酸化蛋白檢測(cè)試劑盒適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動(dòng)物組織中提取磷酸化蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。細(xì)胞磷酸化蛋白提取：
1.提取液制備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2.取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3.用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500ul冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5.在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到磷酸化蛋白。
7.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
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